Portia de Rossi nació en Melbourne, Australia, el 31 de enero de 1973. Su madre, que tuvo otro hijo además de ella, la crió en solitario después de que su padre muriera cuando ella tenía 9 años. A los 15, se cambió de nombre (en realidad se llama Amanda Lee Rogers) y comenzó a involucrarse en diversos proyectos, sobre todo en anuncios de televisión y en trabajos como modelo.

En un principio. Portia no mostró interés por actuar profesionalmente (a pesar de que parecía tener un talento natural para ello), y en su lugar se matriculó en la Universidad de Melbourne con esperanzas de  convertirse en  abogada, obteniendo sobresalientes en la carrera.

Un año después de empezar sus estudios, un director de casting se acercó a Portia tras haberla visto en algunos anuncios y pensar que sería perfecta para la película Sirenas, interpretada por Hugh Grant. Ella obtuvo el papel de una modelo de desnudos. Portia declaró que ese papel “le dio un completo vuelco a mi vida”, y efectivamente, así fue. Durante un viaje a Denver en 1995, Portia decidió cambiar su billete de vuelta a Sydney por uno a Los Angeles con la intención de continuar con su recién descubierta pasión. Aunque las cosas no fueron fáciles al principio, acabó por establecerse junto a su nuevo novio, el director de documentales Mel Metcalfe, y todo empezó a funcionar.

Portia apareció en muchas películas de escasa envergadura, incluyendo The Woman in the Moon, Perfect Assassins (telefilm), The Invisibles y American Intellectuals, además de sus pequeños papeles en Scream 2 y Stigmata. No obstante, su gran éxito le llegó en la pequeña pantalla, cuando David E. Kelley, el creador de Ally McBeal, la llamó para hacer la prueba para el papel de Nelle, que le había sido ofrecido anteriormente a Vanesa Marcil (quien lo rechazó para participar en Beverly Hills 90210).

Para Portia, era el papel de su vida. Había seguido religiosamente Ally McBeal desde su estreno en 1997. Su actuación en esa serie le valió muchos elogios, e incluso el premio SAG al “Mejor reparto de comedia”, que compartió con sus compañeros. David Kelley dijo una vez con respecto a ella que “es muy inteligente, y eso sale a relucir cuando actúa”.

Portia no abandonó el cine, y apareció en otras películas como Who is Cletis Tout?, Witness y The Night We Called It a Day. Ally McBeal dejó de emitirse en 2002, tras cinco temporadas, pero Portia encontró pronto otro papel televisivo: en 2003 aceptaba interpretar a Lindsay, la hermana de Jason Bateman, en la serie de Fox Arrested Development, por la que ganó un premio Golden Satellite a la Mejor Actriz de Serie, Comedia o Musical en 2005. Sus proyectos más recientes son Dead & Breakfast y Cursed.

Tras su ruptura con la cantante Francesca Gregorini, Portia comenzó a salir con la actriz y presentadora Ellen DeGeneres.  El 16 de agosto de 2008 en una ceremonia íntima celebrada en Los Ángeles tras cuatro años de noviazgo, Portia y Ellen se dieron el "Sí quiero".