A lo largo de la serie han existido varios personajes lésbicos.

El personaje de Jo Lipsett aparece en el episodio 1º5ª temporada.

Jo una joven profesora de 31 años que trae importantes cambios a su llegada a Waterloo Road. Apasionada con lo que hace, bajo su aspecto juvenil, se esconde una tradicional maestra de escuela que exuda confianza y autoridad. Su sexualidad no es ningún secreto para el personal y alumnado. Ros es una de las mejores estudiantes del instituto siendo consejera de los alumnos más jóvenes con problemas.

En el episodio 17x5ª temporada, cuando Ros descubre que Jo, su tutora de francés es lesbiana, tiene un enamoramiento con ella e intenta besarla lo que sorprende a Jo, y esta decide contárselo a Rachel. Sin embargo cuando Ros declara públicamente su amor por Jo diciendo que ha sido alentada por ella, Rachel no tiene más remedio que suspender a la profesora. Con lo sucedido Jo se da cuenta que la confianza que desprende como profesora puede acarrear consecuencias, y decide abandonar el instituto.

Nikki/Lorraine
Nikki Boston una profesora de inglés se une al profesorado en la temporada 7ª. Nikki es una profesora diferente a cualquier otro maestro de Waterloo Road, con una manera única de enseñar se hizo en seguida con el agrado de los alumnos y profesores.
Cuando el instituto se traslada a Escocia, Nikki decide no unirse a ellos, pero más tarde cambia de opinión y regresa como jefa de la PRU, para la integración en la educación de jóvenes con problemas.

En la 8ª temporada aparece Lorraine Donnegan, una ex alumna filantropa y empresaria del nuevo instituto Waterloo Road. A lo largo de la serie se va estrechando la amistad de Lorraine y Nikki. Lorraine elige a Nikki para ser la nueva jefa adjunta sin consultarlo con nadie por lo que Nikki se ve forzada a demostrar su valía tanto a los profesores como a los alumnos. Lorraine confía a Nikkie que tiene problemas financieros y que no sabe si puede llegar a mantener la escuela abierta al menos que se enfrenten a algunos recortes. Nikki y Lorraine discuten los motivos que llevaron a Lorraine a convertirla en jefa adjunta y Lorraine le dice que cuenta con ella, y que no la ve como su perrito faldero y luego la besa. 

Nikki y Lorraine posteriormente rompen la relación.

 

Nikki/Vix
En la 9ª temporada Nikki regresa tanto como jefa de PRU como profesora de inglés.  En el episodio 10º en la boda de Simon, Nikki conoce a Victoria 'Vix' Spark, hermana de Sue, otra profesora, con la que surge una gran atracción. Aunque paren que están en una estable relación, tratan de mantenerlo en secreto. En el episodio 11 Vix acude a la sala de profesores con la escusa de conseguir un regalo para el cumpleaños de su padre, y desliza discretamente un móvil a Nikki. Cuando Vix se marcha, Nikki recibe el mensaje "Teniendo sucios pensamientos contigo".

Posteriormente Vix declara delante de su hermana y de todo el instituto que está enamorada de Nikki y la besa, pero Nikki sorprendida y molesta se separa de ella y se marcha, dejando a una Vix confundida. Después de las clases, Nikki entra al bar donde Vix, su hermana y otros compañeros están tomando algo y Nikki confiesa a Vix que ella también está enamorada de ella y se besan.

En el episodio 12º Nikki se declara a Vix y se comprometen. Eve, la hija que tuvo Nikki de joven la ha estado buscando y no sabe que su madre es lesbiana y que está saliendo con Vix. Nikki no sabe como contárselo por lo que pide a Vix que se lleve sus cosas del apartamento, para aparentar que sólo vive ella, lo que molesta a Vix. Sin embargo Eve toma bien la noticia y Nikki presenta a Vix y a Eve.

Pero Nikki se acuesta una noche con Hector, el profesor de gimnasia y cuando Vix se entera, rompe con ella. Tras semanas disculpándose, Nikki escribe una carta que con la ayuda de otro profesor se la entregan. Una de las alumnas Gabriella, acusa a Nikki de asaltarla y Vix sin la menor duda de su inocencia, acude a consolarla y pedirle que se una a ella en su viaje a Alemania. Nikki le dice que si se marcha con ella, Gabriella gana, algo que no quiere por lo que muy a su pesar no aceptar.

En el último momento, Nikki va en busca de Vix y le pide una y otra vez perdón y prometiéndola no volver hacerla nunca más daño. Nikki le cuenta las razones que la llevaron a acostarse con Hector a pesar de que era feliz y confiesa a Vix lo mucho que la ama. Vix también confiesa que quiere estar con Nikki por el resto de su vida. Nikki y Vix se abrazan.